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上海埃泽思生物科技有限公司

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人真皮成纤维细胞(上海埃泽思AC-2001005)
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产品: 浏览次数:109人真皮成纤维细胞(上海埃泽思AC-2001005) 
品牌: APPLIED CELL
产品名称: Applied CellTM人真皮成纤维细胞
货 号: AC-2001005
规 格: 1×10*6 cells/管
单价: 3578.00元/支
最小起订量: 1 支
供货总量: 1000 支
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
有效期至: 长期有效
最后更新: 2019-09-11 14:15
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详细信息
                                                                 真皮成纤维细胞

产品基本信息

产品名称

Applied Cell®人真皮成纤维细胞(原代)

货    号

AC-2001005

规    格

1×106 cells/管

运输保存条件

干冰运输或活细胞运输

保质期

冻存细胞暂存-80℃冰箱或液氮中长期保存,活细胞立即放入培养箱中。

产品简介

人真皮成纤维细胞分离自成人耳后真皮组织,成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分,由胚胎时期的间充质细胞分化而来。本公司生产的真皮成纤维细胞采用多种酶联合消化法制备而来,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。人真皮成纤维细胞在皮肤损伤及疤痕修复以及皱纹填充中具有广阔应用前景。

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Serum-Free细胞冻存液(Applied Cell®: Cat. no.AC-1001006

Xeno-Free细胞消化液(Applied Cell®: Cat. no. AC-1001024/1001025 

操作方法

人成纤维细胞培养基配制

1.1 37快速解冻成纤维细胞培养基添加剂,快速溶解时不易破坏添加剂中营养物质,时间大致为10min。待添加剂融化后摇匀,分装或直接按比例添加到基础培养基中,分装后添加剂立即储存于-20-80℃,避免反复冻融 。

1.2将添加剂以10%比例加入到人成纤维细胞基础培养基混匀,即为人成纤维细胞培养基AC-1001015。混合后培养基可在2-8 稳定储存2-3周,不建议使用已配制超过3周的培养基。

1.3人成纤维细胞培养基可直接应用于人真皮、肺、心脏等多种组织器官来源的成纤维细胞的原代分离、扩增与传代培养。

操作方法(以下步骤皆应在无菌条件下操作)

人成纤维细胞复苏(10cm dish)

2.1  从液氮或-80℃冰箱中取出冻存的人成纤维细胞,迅速放入37℃水浴快速融解。

2.2 在生物安全柜或超净台中,将解冻后的细胞悬液缓慢加入5 mL预温的成纤维细胞培养基(AC-1001015)

2.3 1000rpm 离心3 min,吸掉上清,加入10ml成纤维细胞培养基重悬细胞。

2.4 将细胞均匀铺到培养皿中,水平十字振动培养皿使细胞均匀分布,5% CO237℃恒温细胞培养箱中培养24小时后观察细胞状态。

2.5 24h后更换新鲜成纤维细胞培养基继续培养,每2-3天更换培养液。

人成纤维细胞传代培养

1. 在显微镜下观察细胞,当细胞融合度达到90%,即可传代。

2. 在超净台/安全柜中,吸掉原有培养基,加入PBS溶液清洗一次,加入Xeno-Free细胞消化液(AC-1001024/1001025使之完全覆盖皿/瓶底。

3. 室温孵育4-5分钟或37℃孵育2-4分钟,显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。

4. 加入消化液2倍体积的成纤维细胞培养基,用移液器轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞,并轻轻吹打混匀,使细胞完全分散。

5. 将细胞悬液转移到15 mL离心管中,1000 rpm离心3 min

6. 弃上清,加入成纤维细胞培养基,重悬细胞,计数。1:2-1:4比例传代,或按2-5x104 cells/cm2  传代,均匀铺在培养皿/瓶中,置于37℃5%CO2 培养箱中培养。

注意:人成纤维增殖情况与细胞密度密切相关,所以传代时细胞密度不宜过稀。

人成纤维细胞冻存

1.  细胞达到90%汇合度, 吸掉原有培养基PBS清洗一次。

2. 加入Xeno-Free细胞消化液(AC-1001024/1001025)使之完全覆盖皿/瓶底,室温孵育4-5min或37℃孵育2-4min分钟,显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。

3. 加入消化液2倍体积的成纤维细胞培养基,用移液枪轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞,并轻轻吹打混匀,使细胞完全分散。

4.   将细胞悬液转移到15 mL离心管中,1000 rpm离心3 min,吸掉上清。

5. 加入适量Serum-free细胞冻存液AC-1001006,调整细胞冻存密度在1×106 cells/mL左右,每支冻存管分装1.5-2ml。

6. 直接放入-80℃,24h后转入液氮中长期保存

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